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【2h】

Nitrogenase promoter-lacZ fusion studies of essential nitrogen fixation genes in Bradyrhizobium japonicum I110.

机译：日本慢生根瘤菌I110中必不可少的固氮基因的固氮酶启动子-lacZ融合研究。

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DNA fragments containing either the nifD or nifH promoter and 5' structural gene sequences from Bradyrhizobium japonicum I110 were fused in frame to the lacZ gene. Stable integration of these nif promoter-lacZ fusions by homologous double reciprocal crossover into a symbiotically nonessential region of the B. japonicum chromosome provided an easy assay for the effects of potential nif regulatory mutants. The level of beta-galactosidase activity expressed from these two nif promoter-lacZ fusions was assayed in bacteroids of B. japonicum I110 wild type and Fix mutants generated by transposon Tn5 mutagenesis and identified in the accompanying paper. No nif-positive regulatory mutants were identified from among an array of Fix- mutants in which Tn5 was inserted 9 kilobase pairs upstream of the nifDK operon and within the 18-kilobase-pair region separating the nifDK and nifH operons. This result indicates that there are no genes in these regions involved in the regulation of nitrogenase structural gene expression. Interestingly, the level of beta-galactosidase activity expressed from the nifH promoter was twice that expressed from the nifD promoter, suggesting that the normal cellular level of the nifH gene product in bacteroids is in a 2:1 ratio with the nifD gene product instead of in the 1:1 stoichiometry of the nitrogenase enzyme complex.
机译：将含有nifD或nifH启动子以及来自日本根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum I110）的5'结构基因序列的DNA片段与lacZ基因框内融合。这些nif启动子-lacZ融合体通过同源双倒交交叉稳定整合到日本芽孢杆菌染色体的共生非必需区域中，为潜在的nif调控突变体的作用提供了简便的检测方法。在转座子Tn5诱变产生的日本芽孢杆菌I110野生型和Fix突变体的类杆菌中测定了这两个nif启动子-lacZ融合体表达的β-半乳糖苷酶活性，并在随附的论文中进行了鉴定。从一系列Fix-突变体中未鉴定出nif阳性调节突变体，其中Tn5插入nifDK操纵子上游9个碱基对和在分隔nifDK和nifH操纵子的18碱基对区域内。该结果表明在这些区域中没有基因参与硝化酶结构基因表达的调节。有趣的是，从nifH启动子表达的β-半乳糖苷酶活性水平是从nifD启动子表达的水平的两倍，这表明类细菌中nifH基因产物的正常细胞水平与nifD基因产物的比例为2：1。在1：1的固氮酶复合物中。

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